Танасиенко И.В., Емец А.И., Блюм Я.Б. Разработка метода эффективной трансформации ячменя (Hordeum vulgare L.) с помощью Agrobacterium tumefaciens // Сборник научных трудов Никит. ботан. сада. – 2009. – Т. 131. – С. 167-171.

Для усовершенствования протокола агробактериальной трансформации нами было протестировано влияние дополнительных физических параметров, таких как: вакуум инфильтрация (20 мин), ультразвук (1-3 с), последовательная обработка ультразвуком и вакуумом. Для подтверждения факта перемещения плазмидной ДНК в клетки-мишени проводили GUS-тест на транзиентную экспрессию гена β-глюкуронидазы в клетках эксплантов. Воздействие ультразвука приводило к увеличению эффективности трансформации в 1,35 раза, вакуума – почти в два раза. Последовательная обработка ультразвуком и вакуум инфильтрацией приводила к увеличению эффективности трансформации в 2,6 раза.

Ил. 2. Библ. 17.

Tanasienko I.V., Yemets A.I., Blume Ya.B. Advanced method of the effective barley (Hordeum vulgare L.) transformation using Agrobacterium tumefaciens // Collected scientific works of Nikit. Botan. Gard. – 2009. – V. 131. – P. 167-171.

The present study resulted in the development of an efficient protocol for Agrobacterium-mediated transformation used additional parameters such as vacuum infiltration (20 min), sonication (1-3 s‟) and both vacuum infiltration and sonication. To assess confirm the transfer of plasmid DNA to target cells histochemical assay have been used (Jefferson, 1987). It was found that application of vacuum infiltration led to 2,6 fold increase in transformation efficiency, application of sonication led to almost 2 fold increase in transformation efficiency. Using both sonication and vacuum infiltration at the same time led to 2,6 fold increase in transformation efficiency of Agrobacterium-mediated transformation.

Fig. 2. Вibl. 17.